广东省东莞中学、广州二中、惠州一中、深圳实验、珠海一中、中山纪念中学六校2024届高三上学期第三次联考
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21. 塑料的主要成分为聚氯乙烯(PVC)、聚乙烯(PE)和聚丙烯(PP)等，塑料制品方便人们生活的同时，也造成了短时期难以降解的“白色污染”。自然界有多种细菌可以降解塑料的不同成分，研究人员欲通过筛选，并利用基因工程技术培育能降解多种塑料成分的“超级菌”。
（1）研究人员欲比较肠杆菌YT1和芽孢杆菌YP1两类细菌降解PE塑料的能力，配置固体培养基，接种菌株后表层覆盖0.1mm厚的PE塑料。分组实验结果如表所示：
培养基及接种菌株 | 培养基1 | 培养基2 | 培养基3 |
单独培养并接种YT1 | 单独培养并接种YT1 | 提取YT1和YP1的核酸，并与YT1和YP1混合，培养一段时间后选取YP1接种 | |
降解圈（直径D/mm） | 3.5 | 1.8 | 4.2 |
①在筛选能分解PE塑料的菌株时，应将菌株接种到以________为唯一碳源的培养基，从功能上讲，该培养基属于________培养基。
②培养基3中接种混合培养后的YP1，其降解圈直径明显加大，其原因可能是________。
（2）研究人员发现了一种胞外酶基因A，有降解PVC塑料的功能。对A基因测序可知，如果在其调节功能区增加一个碱基对A/T，可大大增强其表达能力。通过经典的大引物PCR定点诱变技术在体外改造A基因(如图1)，然后构建表达载体(如图2)，导入受体菌进而培育“超级菌”。
①图1所示，通过PCR1获得的大引物②是指以________(选填图中引物)延伸得到的DNA链为模板，________(选填图中引物)与之结合延伸得到的DNA子链。要获得图1中的改良A基因至少需要________个PCR循环。
②图2中为实现质粒和改良A基因的正确连接，应选用的限制酶是__________。将构建的表达载体导入受体菌后，在含氨苄青霉素和β-半乳糖苷的平板上培养，长出的白色菌落是成功导入了重组质粒的菌株，判断依据是________。
【答案】（1） ①. PE塑料 ②. 选择 ③. 混合培养过程中发生了转化，YT1的对PE塑料分解能力更高的基因整合到了YP1菌株中
（2） ①. 诱变引物 ②. 引物1 ③. 4 ④. XmaI和BgIⅡ ⑤. 含有改良基因A的重组质粒上LacZ基因被破坏，受体菌不能产生相应的酶，无法分解β-半乳糖苷，不能产生蓝色物质。
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